顯微熒光高光譜成像系統(tǒng)
細(xì)胞學(xué)和病理學(xué)研究,通常是用肉眼或使用顯微鏡測試細(xì)胞、組織或器官標(biāo)本,研究它們受疾病影響時發(fā)生的變化。通過專業(yè)的顯微鏡, 相機(jī)和成像軟件系統(tǒng)提供特別適合病理研究應(yīng)用的解決方案。熒光測量對許多生物學(xué)(葉綠素和類胡蘿卜素)、生物醫(yī)學(xué)(病變的熒光診斷) 和環(huán)境監(jiān)測是必要的測量手段。對于大多數(shù)熒光應(yīng)用來說,產(chǎn)生的熒光能量只相當(dāng)于激發(fā)光能量的3% 左右。熒光的光子能量比激發(fā)光的光子能量要小(所以波長要長),而且一般都是散射光(在各個方向上輻射能量)。
在顯微高光譜應(yīng)用中,內(nèi)置了照明和濾光片用于獲取目標(biāo)的顯微熒光成像及熒光光譜信息,激發(fā)某一特定波長的光來激發(fā)樣本,進(jìn)而使樣本產(chǎn)生相應(yīng)的熒光信號,其顯微鏡的結(jié)構(gòu)、光路、光源進(jìn)行相應(yīng)的設(shè)計以滿足不同的應(yīng)用需求,熒光顯微鏡非常適用于測量和分析各種光波長的吸收和激發(fā)。內(nèi)置熒光顯微鏡設(shè)置利用平板分光器將照明器的光源轉(zhuǎn)折至平行光學(xué)路徑,從機(jī)械的角度來說,此設(shè)置的復(fù)雜程度低于其他數(shù)字視頻顯微鏡系統(tǒng)。與大多數(shù)光學(xué)系統(tǒng)一樣,此系統(tǒng)同樣具備了傳感器、光學(xué)組件以及受檢測物體。
受檢測物體可以包括物體如生物樣品、植物或昆蟲、玻璃或金屬材料,以進(jìn)行檢測或作為檢測目標(biāo)。
設(shè)備結(jié)構(gòu)說明
組成部件:LED、激光、汞燈(100W HBO超高壓球型汞燈)、氙燈(光源選配)、濾光片組、光波導(dǎo)(選配)、熒光濾光片組、熒光顯微鏡、不同倍率的物鏡(平場熒光物鏡:5×,10×,20×,40×, 100×),GaiaField 系列高光譜相機(jī)光譜范圍(400-800nm、400-1000nm、900- 1700nm)、輔助光源、系統(tǒng)支架等。
A. GaiaField系列高光譜相機(jī)
GaiaField-V10E/N17E 高光譜相機(jī)、無需外置掃描結(jié)構(gòu);利用GaiaField 系列產(chǎn)品中的內(nèi)置推掃結(jié)構(gòu)完成圖像的掃描成像工作。利用筆記本電腦或者臺式機(jī)直接對GaiaField 相機(jī)進(jìn)行控制, 完成數(shù)據(jù)的采集、校準(zhǔn)等流程。如需實現(xiàn)大面樣品掃描成像和拼接可選配外置精密電控二維掃描平臺配合GaiaField 系列相機(jī)來完成。
氙燈光源:
光譜范圍:250nm-2500nm; 激發(fā)濾光片:可選;
熒光濾光片:可選;
圖 氙燈光源類型
反射熒光照明光源:數(shù)字式汞燈電源控制盒, 寬電壓90~245VAC ;進(jìn)口OSRAM 100W 直流汞燈;
圖 汞燈特征光譜
LED 光源:350nm~600nm 波段不同功率的LED 光源及組合體。
四波長高功率LED 光源(ThORLABS) 適用于需要多達(dá)4 個波長光源的應(yīng)用。與傳統(tǒng)的非LED 光源( 如鹵素?zé)艉蜌怏w放電燈) 相比,這些四波長光源具有許多優(yōu)勢,例如更高的信噪比( 由于窄帶寬發(fā)射)、更好的穩(wěn)定性、更長的使用壽命、更低的更換成本、無需循環(huán)維護(hù)的簡單操作、以及無需主動冷卻或熱過濾( 由于最小化熱負(fù)載)。
圖 LED Spectra
C. 激發(fā)濾光片的選擇
激發(fā)濾光片是放置于熒光顯微鏡的照明路徑內(nèi)。其目的是只允許熒光激發(fā)波長峰值周圍的窄帶波長通過。
D. 發(fā)射濾光片的選擇
發(fā)射濾光片是放置于熒光顯微鏡的成像路徑內(nèi)。其目的是用于過濾受檢測熒光團(tuán)的整個激發(fā)能量范圍,以及透射該熒光團(tuán)的發(fā)射能量范圍。發(fā)射濾光片能讓樣品產(chǎn)生的所需熒光到達(dá)探測系統(tǒng),同時阻擋不必要的激發(fā)光。與激發(fā)濾光片類似,這種濾光片只讓熒光發(fā)射波長峰值周圍的窄帶波長的光通過。
E. 二向色性濾光片(分光器)
二向色性濾光片或分光器是以45°角放置于激發(fā)濾光片與發(fā)射濾光片之間。其目的是用于將激發(fā)信號反射至受檢測的熒光團(tuán), 然后將發(fā)射信號透射至檢測設(shè)備。理想的二向色性濾光片或分光器應(yīng)能夠在*大反射率和*大透射率之間迅速過渡,激發(fā)濾光片帶寬的理想反射率為>95%,而發(fā)射濾光片帶寬的理想透射率為>90%。選擇濾光片時,應(yīng)該將熒光團(tuán)的相交波長(λ) 考慮在內(nèi),以確保獲得*低雜散光和*高信噪比的熒光圖像。
汞弧燈產(chǎn)生的光線即使在紫外線、可見光譜范圍內(nèi)連續(xù),集中在365nm,400nm,440nm,546nm 和580nm 的離散波長。從紫外線到紅外線,氙燈在整個光譜范圍內(nèi)具有更均勻的強(qiáng)度分布。熒光染料的選擇對于確定熒光顯微鏡的適當(dāng)光源至關(guān)重要。一些熒光探針具有與突出的水銀線重合的激發(fā)帶,而其他熒光探針受益于氙燈的更均勻分布的照射。
圖 顯微鏡結(jié)構(gòu)說明
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